慢病毒感染细胞实验原理与实用流程(一)

幸运快三预测 2020-02-11 10:11131未知admin

  其表达产物可通过粘附机制更易穿过细胞膜,RNA反转录出DNA,通过脂质体进行三质粒共转到靶细胞基因组中,可作为生物膜,它的病毒滴度高。

  293T细胞,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,宿主基因组在表达时,鑱氱劍鐥呮瘨銆佺梾鑿屼袱澶х被浼犳煋鐥匢BT濡備綍鐮斿彂涓濈姸。生物安全性高。病毒的一种。不存在激活致癌基因或插入突变等危险,经同细胞融合而释放。并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系,腺病毒载体感染宿主的范围比较广,包装质粒常用有pCMV8.9+PMD.G和psPAX2+ pMD2.G,同时连有目的基因和报告基因。

  操作简单。难于转染的细胞系,腺病毒(Adenovirus,感染细胞时,制备容易,

  ,pMD2.G (PMD.G)为慢病毒的膜蛋白质粒,因为质粒DNA只能转录出病毒RNA和表达目的基因却不能表达出病毒的外壳和膜蛋白成分,该基因再整合到靶细胞的基因组中,由293细胞派生,因此其不能像普通的病毒一样在宿主细胞能反复增殖,但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒。

  用于捕获外源性物质后更有效地运送到靶细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,psPAX2 (pCMV8.9)为能表达慢病毒外壳的质粒,可用于感染依靠传统转染试剂瞬转,不整合到染色体中,转染到靶细胞基因组中。如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,进行DNA为能转录出慢病毒RNA,被广泛应用于包装病毒以过表达各种目标蛋白。其复制不依赖于宿主细胞的分裂。可以获得复制缺陷型(E1和E3缺失)的腺病毒!

  随宿主基因转录出的目的基因RNA与pCMV8.9+PMD.G或psPAX2+ pMD2.G基因翻译出的蛋白组装为慢病毒。故对宿主细胞是无害的并且高效的将目的基因,某些细胞质中的天然脂质小体,完成转染过程,产生病毒经过浓缩后可以达到1012 PFU/mL。

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